产品货号:
GL1408
中文名称:
4×SDS-PAGE浓缩胶缓冲液(pH6.8)
英文名称:
产品规格:
100mL|500mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂为配制SDS-PAGE浓缩胶的缓冲液,可用于配制各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶,方便、快捷,产品中已加入10% SDS,使用时不用另外加入。
组分 | 100mL | 500mL |
4×SDS-PAGE浓缩胶缓冲液(pH6.8) | 100mL | 500mL |
说明书 | 1份 | 1份 |
保存:室温,有效期1年。
凝胶模具、30% Acr-Bis(29:1)、10%APS(过硫酸铵)、TEMED、蒸馏水
- 过硫酸铵配制成10%溶液后应当-20℃保存,应尽量减少室温存放时间以防失效,有效避免失效的方法是分成小份,-20℃保存,用2~3次,剩余的弃用,亦可4℃保存几天。
- TEMED易挥发,使用后请盖紧瓶盖,另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切,可通过适当调节TEMED的用量,控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
- 配制聚丙烯凝胶的过程中,如果室温较低,可以置于37℃放置,加速凝固。
- 30% Acr-Bis(29:1)有轻微神经毒性,请小心操作。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 试剂开封后请尽快使用,以防影响后续实验效果。
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度,最佳胶浓度请参考附表1。
- 灌制分离胶
各试剂使用量请参考附表3。- 参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具(注:加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触,是否加入上层筛板可根据实际情况选择)。
- 将30% Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和蒸馏水在小烧杯或试管中混合。
- 加入10% APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
- 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1~2cm的水层,使凝胶表面保持平整。
- 静置30~60min,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,表面凝胶已聚合。
- 参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具(注:加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触,是否加入上层筛板可根据实际情况选择)。
- 灌制浓缩胶
各试剂使用量请参考附表2。- 小心倾倒出覆盖在分离胶上的水层。
- 将30% Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和蒸馏水在一个小烧杯或试管中混合。
- 加入10% APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
- 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
- 将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
- 静置10~20min,等待浓缩胶聚合。
- 待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,以免破坏加样孔。
- 进行常规电泳操作。
- 小心倾倒出覆盖在分离胶上的水层。
附表1.不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围
SDS-PAGE分离胶浓度 | 最佳分离范围 |
6% | 50~150kD |
8% | 30~90kD |
10% | 20~80kD |
12% | 12~60kD |
15% | 10~40kD |
附表2.配制5%SDS-PAGE的浓缩胶
凝胶 体积 | 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(mL) | ||||
蒸馏水 | Acr-Bis(30%,29:1) | 4×浓缩胶缓冲液 | 10% APS | TEMED | |
2mL | 1.14 | 0.34 | 0.5 | 0.02 | 0.004 |
4mL | 2.28 | 0.68 | 1 | 0.04 | 0.008 |
6mL | 3.42 | 1.02 | 1.5 | 0.06 | 0.012 |
8mL | 4.56 | 1.36 | 2.0 | 0.08 | 0.016 |
附表3.配制SDS-PAGE分离胶
分离胶 浓度 | 凝胶 体积 | 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(mL) | ||||
蒸馏水 | 30% Acr-Bis(29:1) | 4×分离胶缓冲液 | 10% APS | TEMED | ||
6% | 5mL | 2.75 | 1.0 | 1.25 | 0.05 | 0.004 |
10mL | 5.5 | 2.0 | 2.5 | 0.1 | 0.008 | |
15mL | 8.25 | 3.0 | 3.75 | 0.15 | 0.012 | |
20mL | 11 | 4.0 | 5 | 0.2 | 0.016 | |
8% | 5mL | 2.42 | 1.33 | 1.25 | 0.05 | 0.003 |
10mL | 4.8 | 2.7 | 2.5 | 0.1 | 0.006 | |
15mL | 7.25 | 4.0 | 3.75 | 0.15 | 0.009 | |
20mL | 9.7 | 5.3 | 5 | 0.2 | 0.012 | |
10% | 5mL | 2.08 | 1.67 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
10mL | 4.17 | 3.33 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
15mL | 6.25 | 5.0 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
20mL | 8.3 | 6.7 | 5 | 0.2 | 0.008 | |
12% | 5mL | 1.75 | 2.0 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
10mL | 3.5 | 4.0 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
15mL | 5.25 | 6.0 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
20mL | 7.0 | 8.0 | 5 | 0.2 | 0.008 | |
15% | 5mL | 1.25 | 2.5 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
10mL | 2.5 | 5.0 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
15mL | 3.75 | 7.5 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
20mL | 5.0 | 10.0 | 5 | 0.2 | 0.008 |
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